Tag Archives: клітини MCF-7
Регулювання експресії генів NOX на рівні транскрипції в аденокарциномних клітинах грудної залози людини лінії MCF-7 модулюється за участю адаптерного протеїну Ruk/CIN85
А. В. Базалій, І. Р. Горак, Г. В. Пасічник, С. В. Комісаренко, Л. Б. Дробот
Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ
e-mail: drobot@biochem.kiev.ua
NADPH оксидази є ключовими компонентами редоксзалежних сигнальних мереж, залучених до контролю проліферації, виживання та інвазії пухлинних клітин. Накопичено дані, які демонструють специфічні профілі та рівні експресії гомологів NADPH оксидаз (NOXs) та їхніх допоміжних протеїнів у лініях пухлинних клітин людини та первинних пухлинах, а також модулювання цих параметрів позаклітинними чинниками. Нашими попередніми дослідженнями виявлено, що продукування АФК аденокарциномними клітинами ободової кишки людини лінії НТ-29 позитивно корелює з рівнем експресії адаптерного протеїну Ruk/CIN85, тоді як підвищені рівні експресії Ruk/CIN85 у слабо інвазивних аденокарциномних клітинах грудної залози людини лінії MCF-7 сприяють розвитку їхнього малігнізованого фенотипу через конститутивну активацію шляху Src/Akt. З метою з’ясування, чи впливає надекспресія Ruk/CIN85 у клітинах MCF-7 на регулювання транскрипції генів NOXs, був проведений скринінг вмісту мРНК NOX1, NOX2, NOX3, NOX4, NOX5, DUOX1, DUOX2 та регуляторної субодиниці p22Phox в субклонах клітин MCF-7 із різними рівнями експресії Ruk/CIN85 за допомогою кількісної полімеразної ланцюгової реакції (qPCR). Cистемні різноспрямовані зміни рівня мРНК для NOX1, NOX2, NOX5, DUOX2 та p22Phox було виявлено в клітинах MCF-7 із надекспресією адаптерного протеїну порівняно з контрольними клітинами дикого типу. Пригнічення експресії Ruk/CIN85 за допомогою технології РНК-інтерференції призводило до реверсії виявлених змін. З’ясування молекулярних механізмів, що опосередковують вплив Ruk/CIN85 на регулювання транскрипції генів NOXs, потребує подальших досліджень.
Множинні молекулярні форми адаптерного протеїну Ruk/CIN85 специфічно асоційовані з різними субклітинними компартментами в аденокарциномних клітинах молочної залози людини MCF-7
Б. O. Виннитська-Мироновська1, Я. П. Бобак1, Г. В. Пасічник2,
Н. І. Ігуменцева1, А. A. Самойленко2, Л. Б. Дробот2
1Інститут біології клітини НАН України, Львів;
2Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
e-mail: drobot@biochem.kiev.ua
Ruk/CIN85 є проксимально розташованим по відношенню до рецепторів «сигнальним» адаптером, до складу якого входять 3 SH3 домени, Pro- і Ser-багаті райони, а також C-кінцевий «coiled-coil» домен. Завдяки використанню різних доменів і мотивів Ruk/CIN85 функціонує як платформа для перетворення сигналів у механізмах внутрішньоклітинного сигналювання. На основі аналізу кДНК були виявлені ізоформи Ruk/CIN85 із різною комбінацією доменів, залучених до протеїн-протеїнових взаємодій. Показано існування додаткових форм, які є продуктами посттрансляційних модифікацій. Однак до цього часу в літературі відсутня точна інформація щодо субклітинного розподілу множинних молекулярних форм Ruk/CIN85 і їх ролі в клітинних відповідях. На моделі аденокарциномних клітин молочної залози людини MCF-7 і з застосуванням низки методичних підходів для фракціонування клітин була показана специфічна асоціація молекулярних форм Ruk/CIN85 із різними субклітинними компартментами. Індукція апоптозу клітин MCF-7 обробкою доксорубіцином або культивуванням за відсутності сироватки призводила як до системних змін внутрішньоклітинної локалізації молекулярних форм Ruk/CIN85, так і до змін їх співвідношення. Одержані дані дозволяють по-новому підійти до оцінки потенційної фізіологічної значимості молекулярних форм Ruk/CIN85 в регуляції різних клітинних функцій.