М. Д. Луцик¹*, Н. О. Манько¹, Р. О. Білий²,
М. М. Луцик² (мол.), Р. С. Стойка¹

¹Інститут біології клітини НАН України, Львів;
²Львівський національний медичний університет імені Данила Галицького, Україна;
*e-mail: lootsikmaxim@gmail.com

Отримано: 12 квітня 2021; Затверджено: 01 липня 2022

Хітозан є біосумісним і здатним до біодеградації природним біополімером, який широко застосовується у різних галузях біології, медицини і фармації, проте його біологічна дія суттєво залежить від ступеня полімеризації (DP) та ступеня деацетилювання (DDA) полімерних ланцюгів. Оцінка ланцюгів хітозану за показником DP потребує застосування вартісного методу високоефективної ексклюзійної хроматографії (HP-SEC). Метою нашого дослідження було визначення профілю молекулярної маси зразків хітозану шляхом електрофорезу у ступінчастому градієнті пористості поліакриламідного гелю, а також оцінка ефективності цього методу для моніторингу очищення фрагментів хітозану і його похідних. Застосували 2 типи гелів із ступінчастим градієнтом пористості: 1) гель із шарами акриламіду концентрації 2,5; 3,5; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0% w/v для нативного хітозану або його високомолекулярних фрагментів; 2) гель із шарами акриламіду концентрації 2,5; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0% w/v для низькомолекулярних фрагментів хітозану. Переважна кількість молекул із пулу хітозану локалізувалась у гелі типу 1 у області 550-40 кДа та розподілялась між трьома бендами, які у різних зразках значно відрізнялись за відсотковим співвідношенням. Електрофорез фрагментів хітозану, фракціонованих із допомогою гель-проникної хроматографії, забезпечував чітке розділення фрагментів середньої молекулярної маси (50-400 кДа) у гелі типу 1 та низькомолекулярних фрагментів (3-40 кДа) у гелі типу 2. Отже, розроблено метод електрофорезу хітозану у ступінчастому градієнті пористості поліакриламідного гелю, який дозволяє охарактеризувати молекулярну масу полімерних ланцюгів у зразках хітозану, а також є ефективним у моніторингу очищення фрагментів хітозану з молекулярною масою в діапазоні від 3 до 400 кДа, отриманих методом гель-проникної хроматографії.