Tag Archives: МТТ-тест
Антибактеріальна дія нових композицій на основі цеоліту в залежності від допування катіонами Ag(+) і Сu(2+)
Н. О. Манько1*, О. О. Ільков2, О. Ю. Ключівська1, В. О. Василечко3,4,
В. В. Сидорчук5, Н. П. Ковальська6, О. І. Костів3, С. Р. Багдай3,
А. В. Зелінський3, О. М. Громико7, Н. В. Скрипченко8,
Я. М. Каличак3, Р. С. Стойка1
1Відділ регуляції клітинної проліферації та апоптозу, Інститут біології клітини НАН України, Львів;
2Галичфарм, Львів, Україна;
3Хімічний факультет, Львівський національний університет імені Івана Франка, Львів, Україна;
4Кафедра харчових технологій, Львівський торговельно-економічний університет, Львів, Україна;
5Відділ окислювальних гетерогенно-каталітичних процесів, Інститут сорбції та проблем ендоекології НАН України, Київ;
6Кафедра фармакогнозії та ботаніки, Національний медичний університет імені О. О. Богомольця, Київ, Україна;
7Біологічний факультет, Львівський національний університет імені Івана Франка, Львів, Україна;
8Відділ акліматизації плодових рослин, Національний ботанічний сад імені М. М. Гришка НАН України, Київ;
*e-mail: mankonazarcb@gmail.com
Отримано: 01 липня 2024; Виправлено: 23 серпня 2024;
Затверджено: 07 жовтня 2024; Доступно онлайн: 28 жовтня 2024
Останнім часом зростає інтерес до вивчення сорбційних та каталітичних властивостей твердих наноматеріалів, зокрема природних цеолітів, як можливих компонентів дезінфекційних засобів. Метою роботи було вивчення антимікробної дії композицій на основі закарпатського клиноптилоліту (Кл), допованого катіонами Ag+ та Сu2+. Ці композиції піддавали ся механохімічній модифікації в етанольному середовищі з додаванням екстракту листя Actinidia arguta, який використовувався як антиоксидант. Отримані композиціїї досліджували за допомогою рентгенівських та лазерних дифракційних аналізаторів, скануючої електронної мікроскопії, FTIR-спектроскопії. Антибактеріальну активність оцінювали за допомогою МТТ-тесту, а продукцію АФК – за допомогою дифенілпікрилгідразилового флуоресцентного барвника. Використовували наступні штами бактерій: Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens. Показано, що Кл без допанту не виявляв вираженої антибактеріальної активності стосовно оброблених штамів бактерій, незалежно від присутності етанолу чи рослинного екстракту. Зразки Кл, що містять срібло та оброблені екстрактом Actinidia arguta, не підвищували антибактеріальну активність. Зразки, доповані міддю та оброблені етанолом і екстрактом Actinidia arguta, продемонстрували токсичну дію щодо Bacillus subtilis, найвищий токсичний ефект проти P. fluorescence, але значно знизили антибактеріальну активність щодо штамів Staphylococcus aureus і Pseudomonas aeruginosa порівняно з дією зразків, необроблених рослинним екстрактом. Більшість версій композитів Кл продемонстрували залежний від часу антиоксидантний ефект, який можна порівняти з ефектом аскорбінової кислоти, яка використовувалась як позитивний контроль. Отримані дані свідчать про те, що антибактеріальна дія створених композицій на основі Кл пов’язана не з генерацією АФК, а з особливостями їх взаємодії з поверхнею бактеріальних клітин.
Тіакалікс[4]арен фосфонат С-800 як новий флуоресцентний зонд для виявлення іонів цинку в живих клітинах
В. І. Яворовська1, Р. Д. Лабинцева1*, О. В. Бевза1, А. Я. Пугач1,
А. Б. Драпайло2, С. О. Черенок2, В. І. Кальченко2, С. О. Костерін1
1Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
2Інститут органічної хімії НАН України, Київ;
*e-mail: raisa.lab@gmail.com
Отримано: 07 квітня 2021; Затверджено: 07 липня 2021
Іони Zn необхідні для підтримання нормального функціонування організму людини, тому моніторинг вмісту цинку в живих клітинах та розробка сенсорних систем для його відстеження є особливо важливими. Метою роботи було з’ясувати властивості синтетичного тіакалікс[4]арену С-800 (5,11,17,23-тетракіс [(гідрокси-етоксифосфоніл) метил]) – 25,26,27,28-тетрагідрокситіакалікс[4]арену) як потенційного флуоресцентного зонду для моніторингу Zn2+ в живих клітинах. Наші дослідження показали, що тіакалікс[4]арен С-800, який містить чотири гідрокси-етоксифосфонілметилові групи на верхньому вінці молекули, проявляв флуоресцентні властивості за λ 340 нм. Інтенсивність флуоресценції тіакалікс[4]арену C-800 істотно зростала у присутності Zn2+, тоді як Mg2+, Ca2+, Cd2+ та Pb2+, не впливали на цей показник. Комп’ютерне моделювання продемонструвало, що два катіони Zn взаємодіють з атомами кисню чотирьох гідрокси-етоксифосфонілметильних груп. Показано, що тіакалікс[4]арен C-800 швидко проникав у клітини міометрія щурів, що призводило до підвищення рівня внутрішньоклітинної флуоресценції. Додавання Zn2+ до забарвлених тіакалікс[4]ареном C-800 клітин супроводжувалося ще більшим зростанням інтенсивності внутрішньоклітинного флуоресцентного сигналу. Тіакалікс[4]aрен C-800 не впливав на генерування активних форм кисню в клітинах міометрія, і не спричиняв зниження життєздатності клітин за дії у діапазоні концентрацій 50–250 мкМ. Таким чином, тіакалікс[4]арен С-800 потенційно може бути використаний як селективний флуоресцентний зонд для виявлення Zn2+ у живих клітинах.
Хітозан-меланіновий комплекс бджіл: одержання і дослідження його протимікробної активності
М. Луцик1, Н. Манько1, О. Громико2, С. Тістечок2, М. Луцик (мл.)3, Р. Стойка1*
1Інститут біології клітини НАН України, Львів;
2Львівський національний університет імені Івана Франка, Україна;
3Львівський національний медичний університет імені Данила Галицького, Україна;
*e-mail: stoika.rostyslav@gmail.com
Отримано: 04 травня червня 2020; Затверджено: 13 листопада 2020
Протимікробна активність хітозанів морських ракоподібних достатньо добре вивчено, і вони широко застосовуються в медицині. Однак хітозани комах у цьому аспекті вивчено значно гірше, хоч вони також можуть мати практичне значення. Метою цього дослідження було одержання та очистка хітозан-меланінового комплексу (ХМК) із підмору бджіл і дослідження його протимікробної активності. Для визначення протибактерійної активності застосовували МТТ-тест, протигрибкову активність стосовно Candida albicans визначали методом колонієутворювальних одиниць. Описано модифікований спосіб ізолювання і очистки ХМК, який відрізняється від відомих аналогів тим, що деацетилування хітин-меланінового комплексу проводили шляхом гідролізу 40%‑им розчином NaOH без попереднього видалення меланіну з подальшою очисткою ХМК шляхом диференціальної солюбілізації за певних значень рН. Протимікробна активність ХМК характеризувалася переважанням кандидоцидної дії, ІС50 стосовно лабораторного штаму С. albicans становила 50 мкг/мл. Чутливість досліджуваних бактерій до дії ХМК знижувалась у такому порядку: E. coli > St. aureus > Ps. aeruginosa. За характером протимікробної дії ХМК із підмору бджіл можна вважати перспективним компонентом медичних композитів для лікування уражень, спричинених грибком С. albicans.
Плазміноген модулює утворення активних форм оксигену тромбоцитами людини
А. О. Тихомиров, Д. Д. Жерносєков, М. М. Гузик, В. В. Корса, Т. В. Гриненко
Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
e-mail: artem_tykhomyrov@ukr.net
Активні форми оксигену (АФО) є важливими сигнальними молекулами, які контролюють функціонування тромбоцитів, а їх продукція підсилюється під час тромбоцитарної активації. Модуляторні ефекти плазміногену (Pg) на утворення АФО тромбоцитами раніше не досліджувалися. Метою цієї роботи було визначити здатність різних форм Pg впливати на метаболічну активність/виживаність тромбоцитів та утворення ними АФО в стані спокою і за умов активації. Тромбоцити, ізольовані із плазми донорів, преінкубували з Glu- або Lys-Pg (1,2 µM) та активували тромбіном (1,0 од. NIH/мл) або колагеном (1,25 мг/мл). Загальну дегідрогеназну активність мітохондрій визначали за допомогою МТТ-тесту, протокову цитофлуориметрію з використанням зонду H2DCF-DA застосовували для вимірювання внутрішньоклітинних рівнів АФО. Встановлено, що Lys-Pg незначним чином пригнічує відновлення МТТ (P < 0,05 проти контролю). Тромбін спричинював дворазове збільшення рівня метаболічної активності тромбоцитів порівняно з інтактними клітинами. Однак активація, індукована тромбіном, була менш вираженою у разі тромбоцитів, преінкубованих з Pg, причому Lys-Pg спричинював більший інгібувальний ефект. На відміну від тромбіну колаген значно пригнічував метаболічну активність тромбоцитів (на 60% від контрольної величини, P < 0,05). Glu- та Lys-Pg не впливали на активність колагенстимульованих тромбоцитів у МТТ-тесті. Сортінг тромбоцитів за здатністю продукувати АФО виявив дві різні субпопуляції клітин. Зростання продукції АФО спостерігалося за активації тромбоцитів як тромбіном, так і колагеном. Pg (Lys-форма більшою мірою) підсилював внутрішньоклітинну генерацію АФО у тромбінстимульованих тромбоцитах. Показано, що посилення Pg генерації АФО, яке передує дії агоністів, може призводити до зниження їх життєздатності та функціональної активності. Це дослідження доповнює уявлення про можливі механізми впливу Pg на функціонування тромбоцитів.