Ukr.Biochem.J. 2014; Том 86, №6, листопад-грудень, c. 31-38

doi: http://dx.doi.org/10.15407/ubj86.06.031

Роль глікозилювання у секреції та стабільності α-галактозидаз мікроміцетів

12.03.2016   Без категорії   No comments

Н. В. Борзова, О. В. Гудзенко, Л. Д. Варбанець

Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України, Київ;
e-mail: nv_borzova@bigmir.net

Досліджено вплив інгібіторів глікозилювання (тунікаміцину та 2-дезокси-D-глюкози) на активність, стабільність та продукцію глікозидаз мікроміцетів. Показано, що інгібування N-глікозилювання не впливало на секрецію α-галактозидази Aspergillus niger, проте знижувало вихід α-галактозидаз Cladosporium cladosporioides і Penicillium canescens. Зміна ступеня О-глікозилювання призводила до зниження активності та стабільності α-галактозидаз трьох продуцентів. Активність модифікованих ензимів була значно нижчою, ніж нативних, і становила відповідно 0,33 та 2,6 од./мг для α-галактозидази A. niger, 3,3 та 32,5 од./мг для α-галактозидази C. cladosporioides, 31,1 та 11,66 од./мг для α-галактозидази P. canescens. α-Галактозидаза A. niger повністю втрачала активність впродовж очистки та зберігання. Для α-галактозидаз C. cladosporioides і P. canescens показано зниження термостабільності до 20% при 55 ºС. Також відмічено, що О-деглікозилювання знижувало стійкість цих ензимів до дії протеаз.

Ключові слова: , , , , ,

Посилання:

  1. Mrsa V, Barbarić S, Ries B, Mildner P. Influence of glycosylation on the oligomeric structure of yeast acid phosphatase. Arch Biochem Biophys. 1989 Aug 15;273(1):121-7. PubMed, CrossRef
  2. Wei W, Chen L, Zou G, Wang Q, Yan X, Zhang J, Wang C, Zhou Z. N-Glycosylation affects the proper folding, enzymatic characteristics and production of a fungal β-glucosidase. Biotechnol Bioeng. 2013 Dec;110(12):3075-84. PubMed, CrossRef
  3. Aleshin A, Golubev A, Firsov LM, Honzatko RB. Crystal structure of glucoamylase from Aspergillus awamori var. X100 to 2.2-Ǻ resolution. J Biol Chem. 1992 Sep 25;267(27):19291-8. PubMed
  4. Zhu A, Wang Z-K, Beavis R. Structural studies of α-N-acetylgalactosaminidase: effect of glycosilation on the level of expression, secretion, efficiency, and enzyme activity. Arch. Biochem. Biophys. 1998 Apr;352(1):1-8. PubMed, CrossRef
  5. Buglova TT, Malanchuk VM, Zakharova IYa, Ellanskaya IA, Kulman RA. Isolation, purification and characteristics of fungal α-galactosidase. Mikrobiol Zhurn. 1994;56(4):3-11. (in Russian).
  6. Borzova NV, Varbanets’ LD. Purification and physico-chemical properties of glycosidase of Aspergillus niger 185sh. Mikrobiol Zhurn. 2003 Nov-Dec;65(6):13-23. Ukrainian. PubMed. PubMed
  7. Chaplin M. E., Kennedy J. E. Carbohydrate analysis – Oxford; Washington: IRL Press. 1986. 228 p.
  8. Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 1951 Nov;193(1):265-75. PubMed
  9. DuBois M, Gilles KA, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Anal Chem. 1956 Mar;28(3):350-356. CrossRef
  10. Albershein P, Nevis DJ, English PD, Karr A. A method of analysis of sugars in plant cell wall polysaccharides by gas-liquid chromatography. Carbohydr Res. 1976 Nov;5(3):340-345. CrossRef
  11. Varbanets LD, Zdorovenko GM, Knirel YuA. Methods of endotoxin investigations. Kiev: Naukova dumka, 2006. 237 p. (In Russian).
  12. Dixon M., Webb E. Enzymes. М.: Mir, 1982; 1. P. 98-109. (In Russian).
  13. Savel’ev AN, Eneyskaya EV, Isaeva-Ivanova LS, Shabalin KA, Golubev AM, Neustroev KN. The carbohydrate moiety of alpha-galactosidase from Trichoderma reesei. Glycoconj J. 1997 Dec;14(8):897-905. PubMed, CrossRef
  14. Wei YD, Lee SJ, Lee KS, Gui ZZ, Yoon HJ, Kim I, Je YH, Guo X, Sohn HD, Jin BR. N-glycosylation is necessary for enzymatic activity of a beetle (Apriona germari) cellulase. Biochem Biophys Res Commun. 2005 Apr 1;329(1):331-6. PubMed, CrossRef
  15. Kubicek CP, Panda T, Schreferl-Kunar G, Gruber F, Messner R. O-linked – but not N-linked-glycosylation is necessary for endoglucanase I and II secretion by I and II by Trichoderma reesei. Can J Microbiol. 1987 Aug;33(2):689-703. CrossRef
  16. Varki A., Cummings R. D., Esko J. D., Freeze H., Hart G., Marth J. Essentials of Glycobiology. 2nd edition. NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2009. 784 p.
  17. Powell LD. Inhibition of N-linked glycosylation. Curr Protoc Immunol. 2001 May;Chapter 8:Unit 8.14. PubMed, CrossRef
  18. Neustroev KN, Golubev AM, Ibatullin FM, Firsov LM. Effects of glycosylation inhibitors on glycosidase secretion in Aspergillus awamori var. Х100/D27. Biokhimiia. 1993;58(4):574-579. (In Russian).
  19. Schwarz F, Aebi M. Mechanisms and principles of N-linked protein glycosylation. Curr Opin Struct Biol. 2011 Oct;21(5):576-82. Review. PubMed, CrossRef
Creative CommonsThis work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.