О. В. Гудзенко¹*, Л. Д. Варбанець¹, В. О. Чернишенко²,
Є. М. Стогній², А. М. Остапчук³, В. О. Іваниця³

¹Інститут мікробіології і вірусології ім. Д. К. Заболотного НАН України, Київ;
²Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
³Одеський національний університет ім. І. І. Мечникова, Одеса, Україна;
*e-mail: alena.gudzenko81@gmail.com

Отримано: 18 вересня 2024; Виправлено: 21 жовтня 2024;
Затверджено: 21 листопада 2024; Доступно онлайн: 17 грудня 2024

Мікробні протеази, які здатні розщеплювати еластин, фібрин, фібриноген і колаген, привертають увагу дослідників через їх значний біотехнологічний потенціал поряд з низькою вартістю виробництва. Раніше ми показали, що Bacillus atrophaeus 08 синтезує позаклітинний протеазний комплекс, який виявляє високу еластолітичну, фібриногенолітичну та фібринолітичну дію, а також незначну казеїнолітичну і колагеназну активність. Метою роботи було виділення та очищення протеази Bacillus atrophaeus 08 із супернатанту культуральної рідини та вивчення її фізико-хімічних властивостей і субстратної специфічності. В експерименті використовували осадження сульфатом амонію 90% насичення, гель-проникну та іонообмінну хроматографію. Згідно з отриманими даними, вихід очищеного ензиму з молекулярною масою близько 30 кДа становив 6%, його еластазна активність зросла в 30 разів (420 од/мг протеїну), а фібриногенолітична активність – у 31,8 раза (350 од/мг протеїну). Крім того, ензим також виявляв фібринолітичну дію (35,3 од/мг протеїну), незначну казеїнолітичну активність (1,2 од/мг протеїну) і відсутність колагеназної активності. Термооптимум гідролізу еластину – 37°С, рН-оптимум 3,0 і 9,0-10,0, термооптимум гідролізу фібриногену – 12°С, рН-оптимум – 4.0. Електрофорез SDS-PAAG показав, що Bβ-ланцюг фібриногену майже не розщеплювався навіть через 1 год інкубації з ензимом, тоді як Аα-ланцюг зникав уже на 30-й хв з утворенням фрагментів із молекулярною масою близько 30-45 кДа. Активність досліджуваного ензимного препарату щодо фібрину була значно нижчою, ніж до фібриногену.