Tag Archives: протеаза
Вплив гетерометалічних Ge(IV) – 3d-металів на активність мікробних рамнозидаз, галактозидази і протеаз
О. В. Гудзенко1*, Л. Д. Варбанець1, І. Й. Сейфулліна2,
О. Е. Марцинко2, О. А. Фінік3, К. К. Цимбалюк2,3
1Інститут мікробіології і вірусології ім. М. Заболотного НАН України, Київ, Україна;
2Одеський національний університет імені І. І. Мечникова, Україна;
3ТОВ «Інспекторат Україна», Одеса, Україна;
*e-mail: alena.gudzenko81@gmail.com
Отримано: 18 березня 2025; Виправлено: 12 травня 2025;
Затверджено: 11 червня 2025; Доступно онлайн: 07 липня 2025
В останні роки увагу дослідників привернули координаційні сполуки германію з різними біолігандами, які можуть бути використані як активатори, так і інгібітори ензимів. Метою роботи було дослідити вплив нових гетерометалічних Ge(IV) – 3d-метал комплексів з 1-гідроксиетан-1,1-дифосфоновою кислотою та 1,10-фенантроліном на активність очищених α-L-рамнозидаз, що продукуються Eupenicillium erubescens, Penicillium tardum, Penicillium restrictum, Cryptococcus albidus, α-галактозидази P. restrictum та протеаз з еластолітичною та фібриногенолітичною активністю Bacillus sp. Досліджувані сполуки (концентрація 0,1%) по-різному активували α-L-рамнозидазу залежно від продуцента. Так, активність α-l-рамнозидази E. erubescens стимулювалася [Co(phen)3]4[Ge6(μ-OH)4(μ-O)2(μ-hedp)6]·2СН3СООН·30H2O на 200%, Penicillium tardum – [Zn(phen)2(H2O)2]2[Zn(phen)(H2O)4]2[Ge6(μ-OH)4(μ-O)2(μ-hedp)6]·18H2O на 200%, Penicillium restrictum – [Ni(phen)3]4[Ge6(μ-OH)4(μ-O)2(μ-hedp)6]·2СН3СООН·26H2O на 67%, Cryptococcus albidus – [Co(phen)3]4[Ge6(μ-OH)4(μ-O)2(μ-hedp)6]·2СН3СООН·30H2O на 40%. α-Галактозидаза Penicillium restrictum не зазнала впливу досліджуваних сполук. Еластаза Bacillus sp. IMB B-7883 активувалася за допомогою [Co(phen)3]4[Ge6(μ-OH)4(μ-O)2(μ-hedp)6]·2СН3СООН·30H2O на 70%, але повністю інгібувалася [Fe(phen)3]4[Ge6(μ-OH)4(μ-O)2(μ-hedp)6]·20H2O. Сполуками, що показали найбільший 200% стимулюючий ефект на фібриногенолітичну активність Bacillus sp. IMB B-7883 7883, були [Fe(phen)3]4[Ge6(μ-OH)4(μ-O)2(μ-hedp)6]·20H2O та [Zn(phen)2(H2O)2]2[Zn(phen)(H2O)4]2[Ge6(μ-OH)4(μ-O)2(μ-hedp)6]·18H2O.
Очиcтка та фізико-хімічні властивості протеази Bacillus atrophaeus з еластазною і фібриногенолітичною активністю
О. В. Гудзенко1*, Л. Д. Варбанець1, В. О. Чернишенко2,
Є. М. Стогній2, А. М. Остапчук3, В. О. Іваниця3
1Інститут мікробіології і вірусології ім. Д. К. Заболотного НАН України, Київ;
2Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
3Одеський національний університет ім. І. І. Мечникова, Одеса, Україна;
*e-mail: alena.gudzenko81@gmail.com
Отримано: 18 вересня 2024; Виправлено: 21 жовтня 2024;
Затверджено: 21 листопада 2024; Доступно онлайн: 17 грудня 2024
Мікробні протеази, які здатні розщеплювати еластин, фібрин, фібриноген і колаген, привертають увагу дослідників через їх значний біотехнологічний потенціал поряд з низькою вартістю виробництва. Раніше ми показали, що Bacillus atrophaeus 08 синтезує позаклітинний протеазний комплекс, який виявляє високу еластолітичну, фібриногенолітичну та фібринолітичну дію, а також незначну казеїнолітичну і колагеназну активність. Метою роботи було виділення та очищення протеази Bacillus atrophaeus 08 із супернатанту культуральної рідини та вивчення її фізико-хімічних властивостей і субстратної специфічності. В експерименті використовували осадження сульфатом амонію 90% насичення, гель-проникну та іонообмінну хроматографію. Згідно з отриманими даними, вихід очищеного ензиму з молекулярною масою близько 30 кДа становив 6%, його еластазна активність зросла в 30 разів (420 од/мг протеїну), а фібриногенолітична активність – у 31,8 раза (350 од/мг протеїну). Крім того, ензим також виявляв фібринолітичну дію (35,3 од/мг протеїну), незначну казеїнолітичну активність (1,2 од/мг протеїну) і відсутність колагеназної активності. Термооптимум гідролізу еластину – 37°С, рН-оптимум 3,0 і 9,0-10,0, термооптимум гідролізу фібриногену – 12°С, рН-оптимум – 4.0. Електрофорез SDS-PAAG показав, що Bβ-ланцюг фібриногену майже не розщеплювався навіть через 1 год інкубації з ензимом, тоді як Аα-ланцюг зникав уже на 30-й хв з утворенням фрагментів із молекулярною масою близько 30-45 кДа. Активність досліджуваного ензимного препарату щодо фібрину була значно нижчою, ніж до фібриногену.