Tag Archives: чутливість
Імуноензимний аналіз для визначення загального простат-специфічного антигену
К. М. Шевчук1, О. Б. Бесараб1*, Ю. В. Горшунов1, О. Ю. Галкін1,2
1Національний технічний університет України «Київський політехнічний інститут
імені Ігоря Сікорського», Київ, Україна;
2Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ, Україна;
*e-mail: besarab@lll.kpi.ua
Отримано: 26 серпня 2025; Виправлено: 08 жовтня 2025;
Затверджено: 28 листопада 2025; Доступно онлайн: 23 грудня 2025
Простатоспецифічний антиген (ПСА) залишається найпоширенішим біомаркером для діагностики та моніторингу раку простати. Розробка високоінформативних, чутливих та відтворюваних імуноензимних аналізів для визначення ПСА є важливою для підвищення точності діагностики. Метою дослідження було розробити та оптимізувати неконкурентний «сендвіч»-ELISA для визначення загального ПСА із використанням панелі моноклональних антитіл (mAb) різних груп специфічності та епітопів. Конфігурації «сендвіч»-ELISA було сконструйовано з використанням різних пар антитіл для захоплення та виявлення. Оптимізовано умови сорбції антитіл, робочі концентрації реагентів, параметри інкубації та склад буфера. Аналітична ефективність оцінювалася з використанням препаратів ПСА, стандартизованих відповідно до Міжнародного стандарту ВООЗ (96/670). Найефективніші комбінації антитіл виявлено серед моноклональних антитіл, спрямованих на епітопи P2 (захоплення: 21B7, 11G5, 26B9) та P3 (детектування: 21F4, 23B4, 27C10), причому високоафінна пара 26B9-27C10 демонструвала найкращі сорбційно-детекторні властивості. Використання змішаних кон’югатів не покращило чутливість у діапазоні 1-10 нг/мл ПСА. Гідрофілізація поверхні полістирольних пластин підвищувала сигнал ІЕА до 1,39 раза, залежно від ізотипу та походження антитіла. Розроблений оптимізований «сендвіч» ІЕА продемонстрував високу специфічність та чутливість для визначення загального ПСА, з аналітичними характеристиками, придатними для потенційного застосування в клінічній діагностиці.
Розробка та характеристика високоінформативного імуноензимного аналізу для виявлення IgG та IgA антитіл до Сhlamydia trachomatis
О. Ю. Галкін1, Ю. В. Горшунов1, О. Б. Бесараб1, О. М. Іванова2
1Національний технічний університет України «Київський політехнічний інститут імені Ігоря Сікорського»;
e-mail: alexfbt@gmail.com;
2ТОВ «Хема», Київ
Метою роботи була розробка високоінформативного імуноензимного аналізу (ІЕА) для виявлення IgG та IgA-антитіл до Сhlamydia trachomatis, а також порівняльна характеристика розробленого аналізу із застосуванням стандартизованих контрольних матеріалів. Дослідження проводилось із використанням: моноклональних антитіл (MкAт) до IgA та IgG людини; рекомбінантних протеїнів Ch. trachomatis – Pgp3; основного протеїну зовнішньої мембрани (MOMP); двох панелей охарактеризованих сироваток та чотирьох референтних ІЕА-наборів. Імунохімічну активність пероксидазних кон’югатів МкАт порівнювали із комерційними аналогами – анти-IgG MкAт 2А11 та анти-IgA MкAт AD3. Показано, що близько половини кон’югатів із одержаної панелі МкАт були активнішими порівняно із кон’югатами референтних антитіл. Цілком виправданим виявилося сумісне використання кон’югатів антитіл, що взаємодіють із різними антигенними детермінантами: у разі виявлення IgG-антитіл до МОМР – у 1,14–1,56 раза; за виявлення IgА-антитіл до МОМР – у 1,16–1,37 раза. Сконструйовані ІЕА оцінювали за допомогою відповідних охарактеризованих панелей сироваток ОСО-42-28-313-00 та ОСО-42-28-314-00. Порівняльні дослідження розроблених ІЕА для виявлення IgG- та IgA-антитіл до МОМР та Pgp3 Ch. trachomatis показали помітну їх перевагу над комерційними наборами, що яскраво демонструє розбіжність у співвідношенні середніх значень оптичної густини позитивних та негативних зразків охарактеризованої панелі сироваток: цей показник для комерційних наборів був менше в 1,36–3,59 раза.
Характеристики імуноензиматичного аналізу для виявлення IgG антитіл до протеїну теплового шоку (HSP-60) Сhlamydia trachomatis
О. Ю. Галкін, О. Б. Бесараб, Т. М. Луценко
Національний технічний університет України
«Київський політехнічний інститут імені Ігоря Сікорського»;
e-mail: alexbio@mail.ua
Метою роботи було дослідження чутливості та специфічності розробленого імуноензиматичного (ІЕ) набору для виявлення антитіл класу IgG до HSP-60 Chlamydia trachomatis (застосовуючи тирамін-біотинову систему ампліфікації сигналу). Дослідження проводили із використанням охарактеризованої панелі сироваток, а також двох референтних ІЕ-наборів аналогічного призначення. Результати вивчення інформативності імуноензиматичного аналізу (ІЕА) для розробленого нами ІЕА показали найвищі специфічність та чутливість (не було зафіксовано хибнонегативних та хибнопозитивних результатів). У 4 із 15 зразків сироваток внутрішньолабораторної панелі, що первинно ідентифіковано як негативні, у разі їх розведення результат визначення анти-HSP-60 IgG-антитіл у референтних ІЕ-наборах змінювався з негативного на позитивний. Характер кривих титрування хибнонегативних сироваток та комерційних моноклональних антитіл А57-В9 до HSP-60 C. trachomatis після інкубації протягом 24 год свідчив про присутність у цих зразках антиідіотипових антитіл. За розведення сироваток ідіотип-антиідіотипові комплекси дисоціювали, що й обумовлювало зміну результату тестування. Доведено високу інформативність розробленого ІЕ-набору для виявлення антитіл класу IgG до HSP-60 C. trachomatis. У сироватках крові осіб, інфікованих збудником урогенітального хламідіозу, виявлено антиідіотипові антитіла, які виявляють анти-HSP-60 C. trachomatis активність та є однією з причин хибнонегативних результатів відповідних тестів на основі ІЕА.