Tag Archives: чутливість
Розробка та характеристика високоінформативного імуноензимного аналізу для виявлення IgG та IgA антитіл до Сhlamydia trachomatis
О. Ю. Галкін1, Ю. В. Горшунов1, О. Б. Бесараб1, О. М. Іванова2
1Національний технічний університет України «Київський політехнічний інститут імені Ігоря Сікорського»;
e-mail: alexfbt@gmail.com;
2ТОВ «Хема», Київ
Метою роботи була розробка високоінформативного імуноензимного аналізу (ІЕА) для виявлення IgG та IgA-антитіл до Сhlamydia trachomatis, а також порівняльна характеристика розробленого аналізу із застосуванням стандартизованих контрольних матеріалів. Дослідження проводилось із використанням: моноклональних антитіл (MкAт) до IgA та IgG людини; рекомбінантних протеїнів Ch. trachomatis – Pgp3; основного протеїну зовнішньої мембрани (MOMP); двох панелей охарактеризованих сироваток та чотирьох референтних ІЕА-наборів. Імунохімічну активність пероксидазних кон’югатів МкАт порівнювали із комерційними аналогами – анти-IgG MкAт 2А11 та анти-IgA MкAт AD3. Показано, що близько половини кон’югатів із одержаної панелі МкАт були активнішими порівняно із кон’югатами референтних антитіл. Цілком виправданим виявилося сумісне використання кон’югатів антитіл, що взаємодіють із різними антигенними детермінантами: у разі виявлення IgG-антитіл до МОМР – у 1,14–1,56 раза; за виявлення IgА-антитіл до МОМР – у 1,16–1,37 раза. Сконструйовані ІЕА оцінювали за допомогою відповідних охарактеризованих панелей сироваток ОСО-42-28-313-00 та ОСО-42-28-314-00. Порівняльні дослідження розроблених ІЕА для виявлення IgG- та IgA-антитіл до МОМР та Pgp3 Ch. trachomatis показали помітну їх перевагу над комерційними наборами, що яскраво демонструє розбіжність у співвідношенні середніх значень оптичної густини позитивних та негативних зразків охарактеризованої панелі сироваток: цей показник для комерційних наборів був менше в 1,36–3,59 раза.
Характеристики імуноензиматичного аналізу для виявлення IgG антитіл до протеїну теплового шоку (HSP-60) Сhlamydia trachomatis
О. Ю. Галкін, О. Б. Бесараб, Т. М. Луценко
Національний технічний університет України
«Київський політехнічний інститут імені Ігоря Сікорського»;
e-mail: alexbio@mail.ua
Метою роботи було дослідження чутливості та специфічності розробленого імуноензиматичного (ІЕ) набору для виявлення антитіл класу IgG до HSP-60 Chlamydia trachomatis (застосовуючи тирамін-біотинову систему ампліфікації сигналу). Дослідження проводили із використанням охарактеризованої панелі сироваток, а також двох референтних ІЕ-наборів аналогічного призначення. Результати вивчення інформативності імуноензиматичного аналізу (ІЕА) для розробленого нами ІЕА показали найвищі специфічність та чутливість (не було зафіксовано хибнонегативних та хибнопозитивних результатів). У 4 із 15 зразків сироваток внутрішньолабораторної панелі, що первинно ідентифіковано як негативні, у разі їх розведення результат визначення анти-HSP-60 IgG-антитіл у референтних ІЕ-наборах змінювався з негативного на позитивний. Характер кривих титрування хибнонегативних сироваток та комерційних моноклональних антитіл А57-В9 до HSP-60 C. trachomatis після інкубації протягом 24 год свідчив про присутність у цих зразках антиідіотипових антитіл. За розведення сироваток ідіотип-антиідіотипові комплекси дисоціювали, що й обумовлювало зміну результату тестування. Доведено високу інформативність розробленого ІЕ-набору для виявлення антитіл класу IgG до HSP-60 C. trachomatis. У сироватках крові осіб, інфікованих збудником урогенітального хламідіозу, виявлено антиідіотипові антитіла, які виявляють анти-HSP-60 C. trachomatis активність та є однією з причин хибнонегативних результатів відповідних тестів на основі ІЕА.