Ukr.Biochem.J. 2018; Том 90, № 3, травень-червень, c. 70-83

doi: https://doi.org/10.15407/ubj90.03.070

Розробка та характеристика високоінформативного імуноензимного аналізу для виявлення IgG та IgA антитіл до Сhlamydia trachomatis

О. Ю. Галкін1, Ю. В. Горшунов1, О. Б. Бесараб1, О. М. Іванова2

1Національний технічний університет України «Київський політехнічний інститут імені Ігоря Сікорського»;
e-mail: alexfbt@gmail.com;
2ТОВ «Хема», Київ

Метою роботи була розробка високо­інформативного імуноензимного аналізу (ІЕА) для виявлення IgG та IgA-антитіл до Сhlamydia trachomatis, а також порівняльна характеристика розробленого аналізу із застосуванням стандартизованих контрольних матеріалів. Дослідження проводилось із використанням: моноклональних антитіл (MкAт) до IgA та IgG людини; рекомбінантних протеїнів Ch. trachomatis – Pgp3; основного протеїну зовнішньої мембрани (MOMP); двох панелей охарактеризованих сироваток та чотирьох референтних ІЕА-наборів. Імунохімічну активність пероксидазних кон’югатів МкАт порівнювали із комерційними аналогами – анти-IgG MкAт 2А11 та анти-IgA MкAт AD3. Показано, що близько половини кон’югатів із одержаної панелі МкАт були активнішими порівняно із кон’югатами референтних антитіл. Цілком виправданим виявилося сумісне використання кон’югатів антитіл, що взаємодіють із різними антигенними детермінантами: у разі виявлення IgG-антитіл до МОМР – у 1,14–1,56 раза; за виявлення IgА-антитіл до МОМР – у 1,16–1,37 раза. Сконструйовані ІЕА оцінювали за допомогою відповідних охарактеризованих панелей сироваток ОСО-42-28-313-00 та ОСО-42-28-314-00. Порівняльні дослідження розроблених ІЕА для виявлення IgG- та IgA-антитіл до МОМР та Pgp3 Ch. trachomatis показали помітну їх перевагу над комерційними наборами, що яскраво демонструє розбіжність у співвідношенні середніх значень оптичної густини позитивних та негативних зразків охарактеризованої панелі сироваток: цей показник для комерційних наборів був менше в 1,36–3,59 раза.

Ключові слова: , , , , ,


Посилання:

  1. Chinov GP. Revalence and clinical characteristic of chlamydia trachomatis and trichomonas vaginalis – the most widespread sexual transmissed infections. Ukr J Dermatol Venerol Cosmetol. 2005;(1): 74-81. (In Ukrainian).
  2. Mavrov GI, Shcherbakova IV, Chinov GP. The treatment of complicated chamydial infection with azithromycin (Sumamed) using in combination with pathogenetic therapy. Ukr J Dermatol Venerol Cosmetol. 2010; (3): 123-127. (In Russian).
  3. Isakov VA, Kulyashova LB, Berezina LA, Svarval AV. Laboratory diagnostics of urogenital chlamydiosis. Part 2. Methods of diagnosis of chlamydial infection: an analytical review (see the beginning No 1, 2012). Terra Medica. Labor. Diagn. 2013; 1: 13-21. (In Russian).
  4. Rahmatulina MR, Popov DV, Plahova KI. Current concepts of the epidemiology, clinical picture, diagnostics and therapy of non-complicated and complicated forms of the urogenital chlamydia infection in men. Vestnik Dermatol Venerol. 2012; 6: 35-41.
  5. Ganda IS, Zhong Q, Hali M, Albuquerque RLC, Padilha FF, da Rocha SRP, Whittum-Hudson JA. Dendrimer-conjugated peptide vaccine enhances clearance of Chlamydia trachomatis genital infection. Int J Pharm. 2017 Jul 15;527(1-2):79-91. PubMed, PubMedCentral, CrossRef
  6. Molina DM, Pal S, Kayala MA, Teng A, Kim PJ, Baldi P, Felgner PL, Liang X, de la Maza LM. Identification of immunodominant antigens of Chlamydia trachomatis using proteome microarrays. Vaccine. 2010 Apr 9;28(17):3014-24. PubMed, PubMedCentral, CrossRef
  7. Galkin A, Dugan A, Solovjova V, Bondarenko L. New monoclonal antibodies to human IgA: obtaining and study of biological properties. Br Biotechnol J. 2015. 8(4): 1-9.  CrossRef
  8. Tijssen P. Practice and theory of enzyme immunoassays. Lab Techiques Biochem Mol Biol. 1985; 15: 548 p. CrossRef
  9. Galkin OYu, Savchenko AA, Nikitina KI,  Dugan OM. Obtaining and study of properties of new monoclonal antibodies against human IgE. Ukr Biokhim Zhurn. 2013 Sep-Oct;85(5):81-7. (In Ukrainian). PubMed, CrossRef
  10. Winstanley CE, Ramsey KH, Marsh P, Clarke IN. Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibodies to a common urogenital derivative of Chlamydia trachomatis plasmid-encoded PGP3. J Immunol Methods. 2017 Jun;445:23-30. PubMed, CrossRef
  11. Donati M, Laroucau K, Storni E, Mazzeo C, Magnino S, Di Francesco A, Baldelli R, Ceglie L, Renzi M, Cevenini R. Serological response to pgp3 protein in animal and human chlamydial infections. Vet Microbiol. 2009 Mar 16;135(1-2):181-5.  PubMed, CrossRef
  12.  Murdin AD, Su H, Manning DS, Klein MH, Parnell MJ, Caldwell HD. A poliovirus hybrid expressing a neutralization epitope from the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis is highly immunogenic. Infect Immun. 1993 Oct;61(10):4406-14. PubMed, PubMedCentral
  13. Pacchiarotti A, Sbracia M, Mohamed MA, Frega A, Pacchiarotti A, Espinola SM, Aragona C. Autoimmune response to Chlamydia trachomatis infection and in vitro fertilization outcome. Fertil Steril. 2009 Mar;91(3):946-8.  PubMed, CrossRef
  14. Cortiñas P, Muñoz MG, Loureiro CL, Pujol FH. Follicular fluid antibodies to Chlamydia trachomatis and human heat shock protein-60 kDa and infertility in women. Arch Med Res. 2004 Mar-Apr;35(2):121-5. PubMed, CrossRef
  15. Obrjadina AP, Kopnina EO, Golubeva IF. Diagnosis of chlamydia. Information materials. N. Novgorod: Diagnostic systems, 2008, 28 p.
  16. Kulyashova LB, Berezina LA, Ivanova MB. Experience in the diagnosis of chlamydial infection. Clin Lab Diagnostics. 2000; (10): 39.
  17. Manzenyuk IM, Vorobyova MS, Nikityunk NM, Fedosov SA, Losev MV. Evaluation of the first russian enzyme immunoassay recombinant test system Chlamy-IgA-DC-Tr for detecting IgA to Chlamydia trachomatis. Clin Lab Diagnostics. 2002; (6): 40-41.
  18. Chevaliez S, Pawlotsky JM. Hepatitis C virus serologic and virologic tests and clinical diagnosis of HCV-related liver disease. Int J Med Sci. 2006;3(2):35-40. PubMed, PubMed, CrossRef
  19. Young H, Moyes A, Seagar L, McMillan A. Novel recombinant-antigen enzyme immunoassay for serological diagnosis of syphilis. J Clin Microbiol. 1998 Apr;36(4):913-7. PubMed, PubMedCentral
  20. Galkin OYu, Besarab AB, Lutsenko TN. Characteristics of enzyme-linked immunosorbent assay for detection of IgG antibodies specific to Сhlamydia trachomatis heat shock protein (HSP-60). Ukr Biochem J. 2017 Jan-Feb;89(1):22-30.  PubMed, CrossRef

Creative CommonsThis work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.