Ukr.Biochem.J. 2013; Том 85, № 3, травень-червень, c. 31-37
doi: http://dx.doi.org/10.15407/ubj87.03.031
Очистка і властивості каталітично активного фрагмента розчинної нуклеозидтрифосфатази з нирок бика
О. Ф. Макарчіков
Гродненський державний аграрний університет, Білорусь;
e-mail: a_makarchikov@yahoo.com
Із нирок бика одержано каталітично активний фрагмент розчинної нуклеозидтрифосфатази (NTPази). Очистка складалася з екстракції та 4 стадій колоночної хроматографії. Питома активність NTPази дорівнювала 37,7 Е/мг протеїну, ступінь очистки ~236 разів. Каталітичний фрагмент NTPази (рН-оптимум – 7,0) виявляє абсолютну залежність від катіонів двовалентних металів і специфічність відносно ITP, GTP, UTP та XTP; нуклеозиддифосфати, АТР, СТР і ІМР не є субстратами. Значення уявних Кm для Mg–ITP-, Mg–GTP- та Mg–ITP-комплексів розраховані графічним методом у координатах Хейнса і дорівнюють 1,70; 0,93 та 0,48 мМ відповідно. За даними гель-фільтрації та електрофорезу в ПААГ у присутності DSNa каталітично активний фрагмент NTPази складається з двох однакових поліпептидних ланцюгів з Мм 54,7 кДа. Одержані результати свідчать про те, що розчинна NTPаза з нирок бика складається з каталітичних і регуляторних структурних одиниць.
Ключові слова: кінетичні властивості, каталітичний фрагмент, молекулярна маса, нуклеотидтрифосфатаза
Посилання:
- BRENDA. The Comprehensive Enzyme Information System [Electronic resource]. Regime of access: http:// www.brenda-enzymes.info.
- Makarchikov AF, Chernikevich IP. Thiamine triphosphatase activity in bovine kidney. Biochem Mol Biol Int. 1998 Sep;46(1):115-23. PubMed, CrossRef
- Makarchikov AF. Partial purification and characterization of a soluble nucleoside triphosphatase from bovine kidney. J Biochem Mol Biol Biophys. 2001;5:525-531.
- Rusina I, Makarchikov A, Lukashenko Y. Study on regulatory properties of a soluble nucleoside triphosphatase from bovine kidney. Vesnik of Yanka Kupala State University of Grodno. 2011; (Ser. 5 (1)):128-133.
- Sapru MK, Geetha H, Shetty KT. A single reagent method of phosphate estimation in phosphatase(s) assay. Indian J Biochem Biophys. 1987 Dec;24(6):340-3. PubMed
- Weber K, Osborn M. The reliability of molecular weight determinations by dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. J Biol Chem. 1969 Aug 25;244(16):4406-12. PubMed
- Davis BJ. Disc electrophoresis. ii. method and application to human serum proteins. Ann N Y Acad Sci. 1964 Dec 28;121:404-27. PubMed, CrossRef
- Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976 May 7;72:248-54. PubMed, CrossRef
- Darbre A. Practical protein chemistry / Darbre A. M .: Mir, 1989. 623 p.
- Agutter PS, Cockrill JB, Lavine JE, McCaldin B, Sim RB. Properties of mammalian nuclear-envelope nucleoside triphosphatase. Biochem J. 1979 Sep 1;181(3):647-58.
PubMed, PubMedCentral, CrossRef - Lewis M, Weissman S. Properties of a soluble nucleoside triphosphatase activity in mammalian liver. Arch Biochem Biophys. 1965 Mar;109:490-8. PubMed, CrossRef
- Naryzhny SN, Krutiakov VM. Non-specific acid nucleoside triphosphatase from cytosol and chromatin of rat liver: partial purification and general properties. Biokhimiia. 1982 Apr;47(4):569-74. Russian. PubMed
- Dahlmann N, Kirchgesser M. Acid nucleoside triphosphatase: partial purification and characterization of a new enzyme from human serum. Biochem Int. 1990;20(2):317-27. PubMed
- Williams MV. Purification and properties of a nucleoside triphosphatase from Sinclair swine. Enzyme. 1984;32(4):201-7. PubMed
- McCarty DR, Selman BR. Partial purification of a nucleoside triphosphatase from the inner membrane of the chloroplast envelope of pea. Arch Biochem Biophys. 1986 Aug 1;248(2):523-31. PubMed, CrossRef
- Mukherjee J, Biswas S. Purification & characterization of a nucleoside triphosphatase from Mimosa pudica. Indian J Biochem Biophys. 1980 Dec;17(6):452-6. PubMed
- Nishimune T, Ito S, Abe M, Kimoto M, Hayashi R. Nucleoside-triphosphatase and hydrolysis of thiamin triphosphate in Escherichia coli. Biochim Biophys Acta. 1987 Jan 20;923(1):74-82. PubMed, CrossRef
- Romani AM. Cellular magnesium homeostasis. Arch Biochem Biophys. 2011 Aug 1;512(1):1-23. Review. PubMed, PubMedCentral, CrossRef
- Ash DE, Schramm VL. Determination of free and bound manganese(II) in hepatocytes from fed and fasted rats. J Biol Chem. 1982 Aug 25;257(16):9261-4. PubMed
- Metzler DE. Biochemistry. The chemical reactions of living cells. Harcourt. Academic Press, 2001;1:937 p.
- Dixon M, Webb E. Enzymes. M: Mir, 1982;2:515 p.
- Smith RM, Martell AE, Chen Y. Critical evaluation of stability constants for nucleotide complexes with protons and metal ions and the accompanying enthalpy changes. Pure Appl Chem. 1991;63(7):1015-1080. CrossRef
