Tag Archives: молекулярна маса
Очиcтка та фізико-хімічні властивості протеази Bacillus sp. L9 з фібрин(оген)олітичною активністю
О. В. Гудзенко1*, Л. Д. Варбанець1, В. О. Чернишенко2, Є. М. Стогній2
1Інститут мікробіології і вірусології ім. Д. К. Заболотного НАН України, Київ;
2Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
*e-mail: alena.gudzenko81@gmail.com
Отримано: 18 вересня 2025; Виправлено: 13 жовтня 2025;
Затверджено: 28 листопада 2025; Доступно онлайн: 23 грудня 2025
Раніше нами із сухої трави прибережної зони Кінбурнської коси було виділено ряд штамів Bacillus sp., які можуть бути перспективними для подальших досліджень як продуценти протеаз із фібринолітичною та фібриногенолітичною активністю. Метою роботи було виділення, очищення та вивчення властивостей фібрин(оген)ази зі штаму Bacillus sp. L9. Препарат ензиму було виділено з супернатанту культуральної рідини Bacillus sp. L9. Вихід очищеного ензиму становив 1,8%, питома фібриногенолітична та фібринолітична активності становили 483 та 383 од/мг протеїну відповідно, молекулярна маса ензиму становила близько 40 кДа, оптимум pH 8,0, термооптимум 40°C. Фібрин(оген)аза Bacillus sp. L9 є сериновою протеазою, в активному центрі якої знаходиться карбоксильна група С-кінцевої (аспарагінової або глютамінової) амінокислоти. На деякій відстані від активного центру локалізовано сульфгідрильні групи, які не беруть участь в каталізі, але відіграють важливу роль в підтриманні каталітично активної конформації протеїнової молекули. Ензим з Bacillus sp. L9 гідролізував молекули фібрину значно повільніше, ніж фібриногену, та виявляв найбільшу специфічність у гідролізі зв’язків, утворених Аα-ланцюгом фібриногену. За специфічністю дії на фібриноген, ензим був ідентифікований як α-фібриноген(оген)аза.
Очистка і властивості каталітично активного фрагмента розчинної нуклеозидтрифосфатази з нирок бика
О. Ф. Макарчіков
Гродненський державний аграрний університет, Білорусь;
e-mail: a_makarchikov@yahoo.com
Із нирок бика одержано каталітично активний фрагмент розчинної нуклеозидтрифосфатази (NTPази). Очистка складалася з екстракції та 4 стадій колоночної хроматографії. Питома активність NTPази дорівнювала 37,7 Е/мг протеїну, ступінь очистки ~236 разів. Каталітичний фрагмент NTPази (рН-оптимум – 7,0) виявляє абсолютну залежність від катіонів двовалентних металів і специфічність відносно ITP, GTP, UTP та XTP; нуклеозиддифосфати, АТР, СТР і ІМР не є субстратами. Значення уявних Кm для Mg–ITP-, Mg–GTP- та Mg–ITP-комплексів розраховані графічним методом у координатах Хейнса і дорівнюють 1,70; 0,93 та 0,48 мМ відповідно. За даними гель-фільтрації та електрофорезу в ПААГ у присутності DSNa каталітично активний фрагмент NTPази складається з двох однакових поліпептидних ланцюгів з Мм 54,7 кДа. Одержані результати свідчать про те, що розчинна NTPаза з нирок бика складається з каталітичних і регуляторних структурних одиниць.