Ukr.Biochem.J. 2019; Том 91, № 1, січень-лютий, c. 30-37

doi: https://doi.org/10.15407/ubj91.01.030

Гуморальна імунна відповідь мишей різних інбредних ліній на простатичний специфічний антиген людини

10.04.2019   Uncategorized   No comments

О. Ю. Галкін1,2, A. Г. Комар3, O. Б. Бесараб1

1Національний технічний університет України «Київський політехнічний інститут імені Ігоря Сікорського»;
e-mail: alexfbt@gmail.com;
2ТОВ «Профарма Плант», Київ, Україна;
3Український медичний центр сертифікації МОЗ України, Київ

Метою дослідження було вивчення гуморальної імунної відповіді на простатичний специфічний антиген (ПСА) для різних типів інбредних ліній мишей з подальшим формуванням рекомендацій щодо відповідних схем імунізації для одержання моноклональних антитіл (МкАт). Дослідження проводили з використанням мишей ліній Balb/c та NZB; ПСА із сперми людини (як імуноген). У разі бустер-імунізацій імуноген попередньо розводили до потрібної концентрації (10 або 30 мкг на 100 мкл) у фізіологічному розчині та вводили у хвостову вену або внутрішньочеревно. За іншої імунізації готували емульсійний розчин імуногену з ад’ювантом до кінцевої концентрації 10 або 30 мкг на 100 мкл: ПСА розчиняли у фізіологічному розчині, додавали такий самий об’єм ад’юванта, і суміш ретельно змішували, щоб утворити стабільну емульсію. Загальну дозу 100 мкл поділяли на дві рівні частини і вводили підшкірно в задні лапи мишей. Імунізація проводилася шляхом одноразового в/ч введення 100 мкл емульсії. Рівень специфічних антитіл визначали титруванням сироватки крові тварин за допомогою непрямого імуноензиматичного аналізу. Проведено серію експериментів для визначення рівня гуморальної відповіді мишей за багатоступеневої імунізації різної тривалості з ПСА (10 і 30 мкг), за внутрішньочеревного введення імуногену та підшкірно з різними ад’ювантами (повний та неповний ад’юванти Фрейнда, ПАФ/НАФ). Остаточну бустерну імунізацію в дозі 30 мкг проводили або способом попереднього введення імуногену, або внутрішньовенно у фізіологічному розчині. Встановлено закономірності гуморальної імунної відповіді мишей на ПСА залежно від шляху­ введення імуногену, його дози та тривалості імунізації. Доведено, що внутрішньочеревне введення забезпечує утворення вищих титрів специфічних антитіл для обох досліджуваних ліній мишей. Миші лінії Balb/c інтенсивніше відповідають на ПСА, ніж миші лінії NZB (для всіх досліджених схем імунізації). Показано, що найефективнішою є схема імунізації з трикратним внутрішньочеревним введенням 10 мкг ПСА впродовж 8 тижнів (перше введення – із ПАФ, решта – із НАФ) та бустер-введенням імуногену внутрішньовенно у фізіологічному розчині.

Ключові слова: , ,

Посилання:

  1. Balk SP, Ko YJ, Bubley GJ. Biology of prostate-specific antigen. J Clin Oncol. 2003 Jan 15;21(2):383-91.  PubMed, CrossRef
  2. Lilja H. Biology of prostate-specific antigen. Urology. 2003 Nov;62(5 Suppl 1):27-33. PubMed, CrossRef
  3. Haythorn MR, Ablin RJ. Prostate-specific antigen testing across the spectrum of prostate cancer. Biomark Med. 2011 Aug;5(4):515-26. PubMed, CrossRef
  4. Ward AM, Catto JW, Hamdy FC. Prostate specific antigen: biology, biochemistry and available commercial assays. Ann Clin Biochem. 2001 Nov;38(Pt 6):633-51. PubMed, CrossRef
  5. Peehl DM. Prostate specific antigen role and function. Cancer. 1995;75(S7):2021-2026.
  6. Duskova K, Vesely S. Prostate Specific Antigen. Current clinical application and future prospects. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 2015; 159(1):018-026. CrossRef
  7. Loeb S, Catalona WJ. Prostate-specific antigen in clinical practice. Cancer Lett. 2007 Apr 28;249(1):30-9. PubMed, CrossRef
  8. Redchuk TA, Korotkevich NV, Kaberniuk AA, Oliinyk ES, Labyntsev AIu, Romaniuk SI, Kolibo DV, Busol VA, Komisarenko SV. Statistical analysis of distribution of antibody level against Mycobacterium bovis antigens for bovine tuberculosis diagnostics. Tsitol Genet. 2010 Sep-Oct;44(5):23-30. (In Russian). PubMed, CrossRef
  9. Romaniuk SI, Kolibo DV, Kavun EM, Radavskii IuL, Tkachenko TIu, Kramarev SA, Komissarenko SV. Specificity of antibodies to diphtheria toxin subunits in children with various forms of diphtheria infections. Ukr Biokhim Zhurn. 2001 Nov-Dec;73(6):73-6. (In Russian). PubMed
  10. Gavrilova ES, Bobrovnik SA, Sherriff G, Myslivets AA, Tarasov SA, Epstein OI. Novel approach to activity evaluation for release-active forms of anti-interferon-gamma antibodies based on enzyme-linked immunoassay. PLoS One. 2014 May 9;9(5):e97017.  PubMed, PubMedCentral, CrossRef
  11. Shtapenko OV, Hevkan II, Slyvchuk YuI, Syrvatka VY, Matvienko NM. Formation and properties of polymer nanolayers to enhance cell growth in vitro. Innov Biosyst Bioeng. 2018;2(2):105-109. CrossRef
  12. Galkin OYu, Savchenko AA, Nikitina KI, Dugan OM. Obtaining and study of properties of new monoclonal antibodies against human IgЕ. Ukr Biokhim Zhurn. 2013; 85(5): 81-87. (In Ukrainian).  PubMed, CrossRef
  13. Galkin OY, Besarab AB, Lutsenko TN. Characteristics of enzyme-linked immunosorbent assay for detection of IgG antibodies specific to Сhlamydia trachomatis heat shock protein (HSP-60). Ukr Biochem J. 2017 Jan-Feb;89(1):22-30. PubMed, CrossRef
  14. Galkin AYu, Kazmirchuk VE, Bondarenko LB. Different mice inbred strains humoral immune response to horseradish peroxidase. Proc Belarus State Univ. Physiol Biochem Mol Basis Funct Biosyst. 2014;9(1):51-55.
  15. Kozhemyakin YuM, Hromov OS, Filonenko MA, Sajfetdinova GA. Scientific and practical recommendations for the maintenance of laboratory animals and work with them. Kiev: Avicenna, 2002. 156 p. (In Ukrainian).
  16. Michel S, Deléage G, Charrier JP, Passagot J, Battail-Poirot N, Sibai G, Jolivet M, Jolivet-Reynaud C. Anti-free prostate-specific antigen monoclonal antibody epitopes defined by mimotopes and molecular modeling. Clin Chem. 1999 May;45(5):638-50. PubMed
  17. Nurmikko P, Väisänen V, Piironen T, Lindgren S, Lilja H, Pettersson K. Production and characterization of novel anti-prostate-specific antigen (PSA) monoclonal antibodies that do not detect internally cleaved Lys145-Lys146 inactive PSA. Clin Chem. 2000 Oct;46(10):1610-8. PubMed
  18. Leinonen J, Wu P, Stenman UH. Epitope mapping of antibodies against prostate-specific antigen with use of peptide libraries. Clin Chem. 2002 Dec;48(12):2208-16. PubMed
  19. Tijssen P. Practice and Theory of Enzyme Immunoassays. In: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. 1985; 15: 674 p. CrossRef
  20. Galkin OYu, Gorshunov YuV, Besarab OB, Ivanova OM.  Development and characterization of highly informative ELISA for the detection of IgG and IgA antibodies to Сhlamydia trachomatis. Ukr Biochem J. 2018;90(3):70-83.  CrossRef
  21. Galkin OYu, Nikolaenko IV, Spivak MYa. Monoclonal antibodies to human immunoglobulins: features of obtaining and application. Immunol Allergol. 2005;1:3-9. (In Ukrainian).
  22. Frosch M, Görgen I, Boulnois GJ, Timmis KN, Bitter-Suermann D. NZB mouse system for production of monoclonal antibodies to weak bacterial antigens: isolation of an IgG antibody to the polysaccharide capsules of Escherichia coli K1 and group B meningococci. Proc Natl Acad Sci USA. 1985 Feb;82(4):1194-8. PubMed, PubMedCentral, CrossRef
  23. Vargas P, Cortés C, Vargas L, Rosemblatt M, Bono MR. Immunization with antigen-pulsed dendritic cells significantly improves the immune response to weak self-antigens. Immunobiology. 2006;211(1-2):29-36. PubMed, CrossRef
  24. Moe GR, Dave A, Granoff DM. Epitopes recognized by a nonautoreactive murine anti-N-propionyl meningococcal group B polysaccharide monoclonal antibody. Infect Immun. 2005 Apr;73(4):2123-8. PubMed, PubMedCentral, CrossRef
  25. Nussbaum G, Anandasabapathy S, Mukherjee J, Fan M, Casadevall A, Scharff MD. Molecular and idiotypic analyses of the antibody response to Cryptococcus neoformans glucuronoxylomannan-protein conjugate vaccine in autoimmune and nonautoimmune mice. Infect Immun. 1999 Sep;67(9):4469-76. PubMed, PubMedCentral
  26. Zhou H, Wang Y, Wang W, Jia J, Li Y, Wang Q, Wu Y, Tang J. Generation of monoclonal antibodies against highly conserved antigens. PLoS One. 2009 Jun 30;4(6):e6087. PubMed, PubMedCentral, CrossRef
Creative CommonsThis work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.