Tag Archives: електрофорез
Виявлення нетипової високомолекулярної форми альбуміну у сироватці крові хворих на COVID-19 пацієнтів
Ю. Кіт1, М. Старикович1, Н. Манько1, С. Каннан2,
А. Орфін3, С. Сушельницький4, Р. Стойка1*
1Інститут біології клітини НАН України, Львів;
2Медичний коледж Катарського університету, Доха, Катар;
3Комунальне некомерційне підприємство Львівської обласної ради «Львівська обласна інфекційна клінічна лікарня», Львів, Україна;
4Oranta Cancer Diagnostics AB, Упсала, Швеція;
*e-mail: stoika.rostyslav@gmail.com
Отримано: 07 червня 2022; Виправлено: 15 вересня 2022;
Затверджено: 29 вересня 2022; Доступно онлайн: 06 жовтня 2022
Зразки сироватки крові 12 важких пацієнтів з Covid-19 та 14 здорових донорів піддавали ТХО-екстракції/ацетон-преципітації з наступним SDS-PAAG-електрофорезом та мас-спектрометрією. У зразках крові пацієнтів із Covid-19 було виявлено один із диференціально експресованих протеїнів з молекулярною масою 76 кДа. Цей протеїн було ідентифіковао за допомогою мас-спектрометрії як сироватковий альбумін людини. Така молекулярна форма альбуміну була відсутня у сироватці крові здорових донорів. Обговорено можливі шляхи утворення нетипової форми сироваткового альбуміну людини та його ймовірне діагностичне значення.
Аналіз профілю молекулярної маси хітозану методом електрофорезу в ступінчастому градієнті пористості поліакриламідного гелю
М. Д. Луцик1*, Н. О. Манько1, Р. О. Білий2,
М. М. Луцик2 (мол.), Р. С. Стойка1
1Інститут біології клітини НАН України, Львів;
2Львівський національний медичний університет імені Данила Галицького, Україна;
*e-mail: lootsikmaxim@gmail.com
Отримано: 12 квітня 2021; Затверджено: 01 липня 2022
Хітозан є біосумісним і здатним до біодеградації природним біополімером, який широко застосовується у різних галузях біології, медицини і фармації, проте його біологічна дія суттєво залежить від ступеня полімеризації (DP) та ступеня деацетилювання (DDA) полімерних ланцюгів. Оцінка ланцюгів хітозану за показником DP потребує застосування вартісного методу високоефективної ексклюзійної хроматографії (HP-SEC). Метою нашого дослідження було визначення профілю молекулярної маси зразків хітозану шляхом електрофорезу у ступінчастому градієнті пористості поліакриламідного гелю, а також оцінка ефективності цього методу для моніторингу очищення фрагментів хітозану і його похідних. Застосували 2 типи гелів із ступінчастим градієнтом пористості: 1) гель із шарами акриламіду концентрації 2,5; 3,5; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0% w/v для нативного хітозану або його високомолекулярних фрагментів; 2) гель із шарами акриламіду концентрації 2,5; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0% w/v для низькомолекулярних фрагментів хітозану. Переважна кількість молекул із пулу хітозану локалізувалась у гелі типу 1 у області 550-40 кДа та розподілялась між трьома бендами, які у різних зразках значно відрізнялись за відсотковим співвідношенням. Електрофорез фрагментів хітозану, фракціонованих із допомогою гель-проникної хроматографії, забезпечував чітке розділення фрагментів середньої молекулярної маси (50-400 кДа) у гелі типу 1 та низькомолекулярних фрагментів (3-40 кДа) у гелі типу 2. Отже, розроблено метод електрофорезу хітозану у ступінчастому градієнті пористості поліакриламідного гелю, який дозволяє охарактеризувати молекулярну масу полімерних ланцюгів у зразках хітозану, а також є ефективним у моніторингу очищення фрагментів хітозану з молекулярною масою в діапазоні від 3 до 400 кДа, отриманих методом гель-проникної хроматографії.
Броунівський рух, електрофорез, хроматографія та макромолекулярна хімія: як все це об’єднує нобелівських лауреатів першої половини ХХ ст. – Т. Сведберга, А. Тізеліуса, Р. Сінга і Г. Штаудінгера
М. В. Григор’єва, В. М. Данилова, С. В. Комісаренко
Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
e-mail: mvgrigorieva@biochem.kiev.ua
Отримано: 31 липня 2019; Затверджено: 13 серпень 2019
Важко уявити як би розвивалися хімія, біологія і медицина без таких аналітичних методів дослідження як ультрацентрифугування, електрофорез та хроматографія. Наразі інноваційні високотехнологічні лабораторні ультрацентрифуги широко застосовуються в самих різних напрямах наукової і практичної діяльності, зокрема в колоїдній хімії, біохімічному аналізі, вірусології, клінічній діагностиці, фармації, нанотехнології та ін. Електрофорез із високою ймовірністю дозволяє виявити протеїнові аномалії, а тому широко використовується в багатьох медичних центрах різних країн для діагностики інфекційно-запальних захворювань, генетичних та імунних порушень, злоякісних пухлин тощо. Хроматографія широко застосовується для біохімічних досліджень, контролю лікарських препаратів, харчових продуктів. Але як виникли ці методи досліджень, які мали величезний вплив на розвиток не тільки різних галузей науки, але багатьох напрямів людської діяльності? Хто були ті особистості, роботи яких стали піонерськими і вплинули на дослідження наступних поколінь науковців? У цій статті ми намагаємося відповісти на ці запитання.
Ідентифікація протеїнових фракцій казеїнового комплексу молока корів
А. В. Юкало
Тернопільський національний технічний університет імені Івана Пулюя, Україна;
e-mail: biotech@tu.edu.te.ua
На сьогодні відомо ціла низка біологічно активних пептидів, які утворюються в процесі протеолізу різних казеїнових фракцій. Використання цього протеїнового комплексу, враховуючи складну гетерогенну природу казеїнів, тісно пов’язане з необхідністю його оперативної ідентифікації. У зв’язку з цим метою роботи було створення електрофоретичної системи для швидкої ідентифікації окремих фракцій під час серійних досліджень казеїнового комплексу. Враховуючи аномальний характер взаємодії казеїнів з додецилсульфатом натрію та близькі значення їхніх молекулярних мас, за основу була взята анодна система електрофорезу в однорідному поліакриламідному гелі. У такій системі казеїни розділяються за їхніми зарядами та розташовуються на електрофореграмі відповідно сучасній класифікації. Як дезагрегуючий агент до складу гелю додається сечовина. На основі проведених досліджень на виготовленому в лабораторії приладі типу Стадієра зі змінною формою електрофоретичної камери встановлено умови швидкої ідентифікації казеїнових фракцій. При цьому було змінено склад гелю і скорочено термін, що дозволило вже за 45 хв ідентифікувати основні фракції казеїнів. Метод може бути корисним для оперативної ідентифікації фракцій казеїну та за експрес-аналізу натуральності молока і молочних продуктів. У такій системі типова електрофореграма казеїну істотно відрізняється від тієї, що характерна для протеїнів бобів сої.