Tag Archives: фаговий дисплей
Порівняльна характеристика методів епітопного картування антигенів протеїнової природи
О. Ю. Галкін
Національний технічний університет України «Київський політехнічний інститут»;
e-mail: alexfbt@mail.ua
Проведено порівняльний аналіз експериментальних підходів до вивчення антигенної структури протеїнів. Переважна більшість відомих методів базується на імунохімічному дослідженні взаємодії молекул протеїнів чи пептидів зі специфічними антитілами. У найефективніших і застосовуваних методах використовують синтетичні та генно-інженерні пептиди. За останні 30 років ці методи пройшли помітний еволюційний шлях, дійшовши до максимальної автоматизації та виявлення антигенних детермінант різного типу (лінійні, конформаційні епітопи та мімотопи). Більшість алгоритмів із пошуку епітопів інтегровано у комп’ютерні програми, що значно полегшує аналіз великих масивів експериментальних даних та дозволяє формувати просторові моделі. Для вирішення прикладних завдань можна використовувати менш трудомісткий метод порівняльного епітопного картування, який базується на аналізі профілів конкуренції різних антитіл під час їх взаємодії з антигеном. До фізичних методів дослідження антигенної будови протеїнів належать рентгеноструктурний аналіз комплексів антиген–антитіло, який можна застосовувати лише для протеїнів, що кристалізуються, та ядерний магнітний резонанс.
Рекомбінантні одноланцюгові варіабельні фрагменти антитіл (scFv) проти Pro(144)-Leu(155) ділянки протеїну С людини
О. С. Олійник, К. О. Паливода, Н. Е. Луговська,
Д. В. Колибо, Е. В. Луговськой, С. В. Комісаренко
Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
e-mail: lenaoliinyk@mail.ru
Метою роботи було одержати рекомбінантні одноланцюгові варіабельні фрагменти антитіл (scFv) проти протеїну С людини, ключового компонента антикоагуляційної системи крові. Для цього було синтезовано пептид, що імітує послідовність Pro144-Leu155 протеїну С, та сконструйовано бібліотеку scFv антитіл миші, імунну до цього пептиду. Методом фагового дисплею зі сконструйованої бібліотеки відібрано scFv 9Е, специфічні до протеїну С. Константа дисоціації scFv 9Е становила 2∙10-9 М. Показано, що scFv 9Е можуть застосовуватись для визначення протеїну С в імуноензимному аналізі та імуноблотингу. Відібрані scFv у подальшому можуть бути використані в дослідженнях протеїну С, а також для розробки методу кількісного визначення протеїну С у плазмі крові людини.