Ukr.Biochem.J. 2015; Том 87, № 2, березень-квітень, c. 88-94

doi: http://dx.doi.org/10.15407/ubj87.02.088

Рекомбінантні одноланцюгові варіабельні фрагменти антитіл (scFv) проти Pro(144)-Leu(155) ділянки протеїну С людини

О. С. Олійник, К. О. Паливода, Н. Е. Луговська,
Д. В. Колибо, Е. В. Луговськой, С. В. Комісаренко

Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ;
e-mail: lenaoliinyk@mail.ru

Метою роботи було одержати рекомбі­нантні одноланцюгові варіабельні фрагменти антитіл (scFv) проти протеїну С людини, ключового компонента антикоагуляційної системи крові. Для цього було синтезовано пептид, що імітує послідовність Pro144-Leu155 протеїну С, та сконструйовано бібліотеку scFv антитіл миші, імунну до цього пептиду. Методом фагового дисплею зі сконструйованої бібліотеки відібрано scFv 9Е, специфічні до протеїну С. Константа дисоціації scFv 9Е становила 2∙10-9 М. Показано, що scFv 9Е можуть застосовуватись для визначення протеїну С в імуноензимному аналізі та імуноблотингу. Відібрані scFv у подальшому можуть бути використані в дослідженнях протеїну С, а також для розробки методу кількісного визначення протеїну С у плазмі крові людини.

Ключові слова: , ,


Посилання:

  1. Mateo J, Oliver A, Borrell M, Sala N, Fontcuberta J. Increased risk of venous thrombosis in carriers of natural anticoagulant deficiencies. Results of the family studies of the Spanish Multicenter Study on Thrombophilia (EMET study). Blood Coagul Fibrinolysis. 1998 Jan;9(1):71-8. PubMed, CrossRef
  2. Bouwens EA, Stavenuiter F, Mosnier LO. Mechanisms of anticoagulant and cytoprotective actions of the protein C pathway. J Thromb Haemost. 2013 Jun;11 Suppl 1:242-53. Review. PubMed, PubMedCentral, CrossRef
  3. Xue S, Li HP, Zhang JB, Liu JL, Hu ZQ, Gong AD, Huang T, Liao YC. Chicken single-chain antibody fused to alkaline phosphatase detects Aspergillus pathogens and their presence in natural samples by direct sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. Anal Chem. 2013 Nov 19;85(22):10992-9. PubMed, CrossRef
  4. Wang Z, Chen Y, Li S, Cheng Y, Zhao H, Jia M, Luo Z, Tang Y. Successful construction and stable expression of an anti-CD45RA scFv-EGFP fusion protein in Chinese hamster ovary cells. Protein Expr Purif. 2014 Feb;94:1-6. PubMed, CrossRef
  5. Rezania S, Ahn DG, Kang KA. Separation of protein C from Cohn Fraction IV-1 by mini-antibody. Adv Exp Med Biol. 2007;599:125-31. PubMed
  6. Albericio F. Solid-Phase synthesis: A practical guide (1 ed.). CRC Press, 2000; 848 p.
  7. Nilsson BL, Soellner MB, Raines RT. Chemical synthesis of proteins. Annu Rev Biophys Biomol Struct. 2005;34:91-118. Review. PubMed, PubMedCentral, CrossRef
  8. Kitagawa T, Aikawa T. Enzyme coupled immunoassay of insulin using a novel coupling reagent. J Biochem. 1976 Jan;79(1):233-6. PubMed
  9. Okamoto T, Mukai Y, Yoshioka Y, Shibata H, Kawamura M, Yamamoto Y, Nakagawa S, Kamada H, Hayakawa T, Mayumi T, Tsutsumi Y. Optimal construction of non-immune scFv phage display libraries from mouse bone marrow and spleen established to select specific scFvs efficiently binding to antigen. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Oct 15;323(2):583-91. PubMed, CrossRef
  10. Oliinyk OS, Kaberniuk AA, Burkaleva DO, Romaniuk SI, Kolibo DV, Shepelyakovskaya AO, Laman A G, Komisarenko S V. Obtaining of recombinant scFv-antibodies against diphtheria toxin using phage display system. Ukr Biokhim Zhurn. 2007;79(5):91-97. (In Russian). PubMed
  11. Oliinyk OS, Kaberniuk AA, Redchuk TA, Korotkevich NV, Labyntsev AJ, Roma­niuk SI, Kolibo DV, Komisarenko SV. Construction of immune library of murine immunoglobulin genes and screening of single-chain Fv-antibodies to diphtheria toxin B subunit. Ukr Biokhim Zhurn. 2009;81(2):60-71. (In Ukrainian). PubMed
  12. Oliinyk OS, Kaberniuk AA, Redchuk TA, Kolibo DV, Komisarenko SV. Construction of bifunctional molecules specific to antigen and antibody’s Fc-fragment by fusion of scFv-antibodies with staphylococcal protein A. Biopolym Cell. 2009;25(3):245-249. (In Ukrainian). CrossRef
  13. Bobrovnik SA, Komisarenko SV, Ilyina LV. Novel and simple ELISA-based method for antibody affinity determination. Ukr Biokhim Zhurn. 2005 Mar-Apr;77(2):169-74. PubMed
  14. Messens J, Collet JF. Pathways of disulfide bond formation in Escherichia coli. Int J Biochem Cell Biol. 2006;38(7):1050-62. Review. PubMed, CrossRef
  15. Novy R., Drott D., Yaeger K., Mierendorf R. Overcoming the codon bias of E. coli for enhanced protein expression. Innovation. 2001;12:1-3.

Creative CommonsThis work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.