Tag Archives: рН-залежність

Вплив сульфіту на АТPазну активність чинника спряження CF(1), ізольованого із хлоропластів шпинату

О. Б. Онойко, А. П. Хомочкін, О. К. Золотарьова

Інститут ботаніки ім. М. Г. Холодного НАН України, Київ;
e-mail: membrana@ukr.net

Проведені дослідження з розкриття механізмів участі сульфіту в регуляції АТР-синтазного комплексу хлоропластів є актуаль­ними з огляду впливу кислотних дощів на фотосинтетичний апарат рослин. Метою роботи було вивчення дії сульфіту на Ca2+– і Mg2+-залежний гідроліз АТР чинником спряження CF1 із хлоропластів шпинату, які піддавали попередній кислотній інкубації. CF1 ізолювали із хлоропластів шпинату (Spinacia oleracea L.). Латентну (приховану) АТРазну активність CF1 активували додаванням у середовище сульфіту натрію. Швидкість гідролізу АТР визначали за звільненням неорганічного фосфату. За наявності 25 мМ екзогенного сульфіту Mg2+-залежна гідролітична активність CF1 зростала у 7 разів, а Ca2+-залежна – у 3 рази порівняно з контролем. Інгібітори карбоангідрази ацетазоламід або етоксизоламід усували стимуляцію гідролізу АТР сульфітом. Спричинена сульфітом стимуляція Ca2+– і Mg2+-АТРазної активності значно посилювалась після інкубації (5 хв) ізольованого CF1 за рН 3,5 із наступним переведенням у середовище з рН 8,0. За таких умов 1 мМ сульфіт спричиняв 10-кратне прискорення гідролізу АТР. Специфічні інгібітори карбоангідраз (50 мкМ) знімали стимулювальний ефект сульфіту. Одержані дані дозволяють припустити, що сульфіт здатен заміщувати бікарбонат у структурі CF1 після вивільнення зв’язаного НСО3 внаслідок кислотної інкубації.

Оборотна рН-залежна активація/інактивація CF(1)-АТPази хлоропластів шпинату

А. П. Хомочкін, О. Б. Онойко, А. В. Семеніхін, О. К. Золотарьова

Інститут ботаніки ім. М. Г. Холодного НАН України, Київ;
e-mail: membrana@ukr.net

Метою роботи було вивчення оборотної рН-залежної регуляції ензиматичної активності каталітичної частини АТР-синтази (3.6.3.14) хлоропластів ‒ чинника спряження CF1. Показано, що нетривала інкубація ізольованого CF1 у середовищах із рН 4,5 або 3,5 призводила до інактивації Ca2+-АТРази. Активність ізольованого чинника спряження CF1 швидко (t1/2 ≈ 1 хв) відновлювалася в середовищі з рН 7,8, до якого додавали розчин NaHCO3 в діапазоні концентрацій від 0,5 до 10 мМ. Mg2+-АТРаза також активувалася внаслідок кислотної інкубації CF1 за наявності 1 мМ NaHCO3 (рН 7,8; 37 °С). Зростання Ca2+– і Mg2+-АТРазної активності CF1, пов’язане з додаванням розчину NaHCO3, повністю усувалося після введення 50 мкМ ацетазоламіду ‒ специфічного інгібітора карбоангідраз. Одержані результати дозволяють припускати існування в структурі CF1 зв’язаного бікарбонату, який бере участь у забезпеченні протонного перенесення.